監測報告基因(Reporter Gene)
rhTNF-α刺激誘導的HEK293 細胞中,rhGFP 報告基因表達的 NF-κB 的活性。在用pNF-κB-rhGFP 報告基因轉染的 HEK293 細胞中,用 3 倍稀釋的rhTNF-α處理。圖像以15min 為間隔獲得。對象飽和度(Object Confluence)表示報告基因的表達和/或啟動(dòng)子的活性。
關(guān)鍵特征(與傳統的終點(diǎn)熒光素酶方法對比)
1)數據豐富:可獲得終 點(diǎn)法無(wú)法得到的多個(gè)時(shí)間點(diǎn)的實(shí)時(shí)動(dòng)態(tài)的圖像和數據;
2)節約成本:無(wú)需裂解,無(wú)需熒光 素酶法需要的終端反應底物,節省時(shí)間和花費;
3)方便:動(dòng)態(tài)的數據使用戶(hù)能在單個(gè)的實(shí)驗中優(yōu)化信號窗(signal window),無(wú)需事先決定何時(shí)終止實(shí)驗;
4)敏感:可得到每個(gè)條 件下的多個(gè)時(shí)間點(diǎn)數據,增加了實(shí)驗的定量性(quantitative robustness);
5)可定制: 用戶(hù)可根據需要定制啟動(dòng)子,修改反應體系,監測藥物對報告基因的作用。
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